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色譜柱什么情況下該更換了

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色(se)譜(pu)(pu)工作者常會(hui)碰到(dao)這樣的(de)(de)(de)問題(ti),什么時(shi)候該(gai)換氣相(xiang)色(se)譜(pu)(pu)儀(yi)的(de)(de)(de)色(se)譜(pu)(pu)柱(zhu)(zhu)了(le)? 色(se)譜(pu)(pu)柱(zhu)(zhu)的(de)(de)(de)塔板數能體現色(se)譜(pu)(pu)柱(zhu)(zhu)的(de)(de)(de)狀態嗎?確定(ding)表明一(yi)支色(se)譜(pu)(pu)柱(zhu)(zhu)應該(gai)“退休"的(de)(de)(de)標準(zhun),從經(jing)驗來看(kan),當一(yi)支色(se)譜(pu)(pu)柱(zhu)(zhu)的(de)(de)(de)塔板數降低(di)到(dao)新柱(zhu)(zhu)子時(shi)的(de)(de)(de)百分之多(duo)少時(shi)就可以(yi)認(ren)為(wei)該(gai)色(se)譜(pu)(pu)柱(zhu)(zhu)不能再使(shi)用了(le)呢?將塔板數作為(wei)評價色(se)譜(pu)(pu)柱(zhu)(zhu)質量的(de)(de)(de)指標合適(shi)嗎?在您的(de)(de)(de)實(shi)驗室里(li)是如(ru)何判斷(duan)一(yi)根色(se)譜(pu)(pu)柱(zhu)(zhu)不可以(yi)再用了(le)呢?

  塔板數是一個粗略的指標,不能作為評價色譜柱的標準。通常使用塔板數來考察氣相色譜儀系統:將新柱子接到儀器上,根據色譜柱生產商提供的測試條件測試該色譜柱,你應該得到和分析報告上同樣的結果。差也應該得到比報告值低10%的塔板數。如果你所測得的塔板數遠遠低于廠家提供的報告數據,這就說明你的色譜系統可能存在一些問題。進樣器、柱外效應、毛細連接以及檢測器都是容易出現問題的地方。
  相信每個氣相色譜儀工作者都會關心分辨率,分辨率是考察一根色譜柱分離具體樣品的好壞程度的指標。色譜的核心任務就是為了使每個峰完成分離,我們在實際工作中需要得到合理峰寬的窄峰以便獲得較低的檢測限(這已經不是什么難題,現在的色譜柱都可以達到這個要求)。
  然而,我們需要考慮的氣相色譜儀另一個因素是塔板數對分辨率的影響僅僅是平方根的關系,這意味著當一根色譜柱的塔板數下降50%,分辨率僅僅下降7%。而當一根色譜柱塔板數下降為新柱子一半的時候,你肯定看到了其它更加嚴重的癥狀告訴你這根色譜柱的壽命不長了。其實,大多數用戶僅僅使用色譜柱塔板數的一小部分。例如,對一支新的150mm×4.6mm,5mm粒徑的色譜柱來講,廠家測試報告上的塔板數為14,000。使用下面的公式可以估算一支色譜柱的塔板數
  N=3000*L/Dp
  L是色譜柱的柱長,以厘米為單位;Dp是填料的粒徑,以微米為單位
  一支150mm×4.6mm,5mm粒徑的色譜柱的柱效大約為9000,比廠家測試數據低30%。在實際的工作中,大多數氣相色譜儀方法僅僅需要這些塔板數的一半,這些色譜方法還有優化的空間嗎?答案是肯定的。可見,色譜柱的塔板數不是分離中重要的參數。
  較好的方法是使用壓力、分辨率和峰形的混合指標來考察一根色譜柱的狀態。壓力的測量是容易的,通常我們確定的氣相色譜儀方法要滿足以下的要求:用氣相色譜儀新柱子時柱壓不高于2500psi,在任何情況下壓力都不超過3000psi。盡管現代的液相色譜系統都可在更高的壓力下使用,但由于高壓產生的系統損耗和泄漏的問題會很嚴重。當壓力超過3000psi時,考慮更換進樣器和色譜柱之間的0.5mm孔徑的在線濾片。如果更換濾片后壓力仍然高,則色譜柱的濾片或者是色譜柱已經被污染,這提示我們該換柱子了。有統計表明,超過60%的色譜柱損壞是由于壓力過高的原因。
  分辨率是我們考察色譜柱的一個非常重要的指標,只要兩個組分可以獲得基線分離,對該分析物的定量就不會有什么問題。對于對稱的高斯峰來講,1.5的分辨率即可得到基線分離;若Rs在1.7至2.0之間則更好。若峰拖尾嚴重則需要更高的分辨率。使用分辨率作為色譜柱的評價指標的好處在于我們可以直觀地看到相鄰的峰的分離情況。
  另外一個考察色譜柱質量的標準是峰形拖尾情況,廠家測試報告的峰形都非常漂亮,但這并不代表該色譜柱分析實際樣品的情況。實際樣品中總是含有或多或少引起峰形拖尾的組分。值得一提的是含有氮原子的化合物,這些化合物和硅膠骨架上的游離硅羥基結合非常緊密,隨著色譜柱使用時間越長,鍵合相流失,拖尾則更加嚴重。然而拖尾情況的改變不像分辨率的改變那樣能夠馬上看出來。基于此,定一個拖尾因子的上限,如美國藥典規定拖尾因子不超過1.8。
  確(que)(que)定(ding)色(se)譜柱“拋棄"標準的(de)(de)(de)時間是(shi)當我們開發分(fen)析(xi)(xi)(xi)方法(fa)或(huo)作方法(fa)認證(zheng)的(de)(de)(de)時候(hou)。通常,在(zai)開發分(fen)析(xi)(xi)(xi)方法(fa)的(de)(de)(de)過程中你(ni)會(hui)試驗幾根色(se)譜柱,分(fen)析(xi)(xi)(xi)足夠多的(de)(de)(de)實際(ji)樣(yang)品,你(ni)知道(dao)當分(fen)離變差的(de)(de)(de)時候(hou)是(shi)什(shen)么(me)樣(yang)的(de)(de)(de)情況。我傾(qing)向于在(zai)開始(shi)時使用(yong)一個寬的(de)(de)(de)范圍。我們的(de)(de)(de)經驗是(shi)這樣(yang)的(de)(de)(de):你(ni)如(ru)果在(zai)開始(shi)時緊縮系(xi)統適用(yong)性要求(qiu),在(zai)方法(fa)認證(zheng)后再放寬這個要求(qiu)是(shi)很(hen)困難的(de)(de)(de)。在(zai)分(fen)析(xi)(xi)(xi)實際(ji)樣(yang)品之前進行(xing)系(xi)統適用(yong)性考察,以確(que)(que)保該(gai)色(se)譜方法(fa)滿足分(fen)析(xi)(xi)(xi)者可(ke)以接受的(de)(de)(de)標準。



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